談談酶聯免疫吸附測定法。
免疫酶技術根據抗原抗體反應后是否需要分離結合的與游離的酶標記物而分為均相和異相兩種類型。在異相法中,又包括液相異相酶免疫測定和固相酶免疫測定二種。固相酶免疫測定也稱為ELISA,是臨床檢驗中應用較廣的免疫測定方法。小分子的ELISA測定法一般有三種競爭分析模式:包被特異性抗體直接競爭法、包被抗原直接競爭法以及間接競爭法。間接競爭ELISA法的基本步驟是:包被抗原--同時加入已知抗體和待測抗原--加入酶標二抗--加入底物顯色液。該法主要應用于未知抗原的檢測。
酶聯免疫吸附法靈敏、準確、可定量、操作簡便、不用貴重儀器設備,且對樣品純度要求不高,特異性好,適用于大批量樣品的檢測,發展快。簡化了樣品預處理和純化過程。但是由于免疫酶的活性不穩定,在應用過程中很容易受到操作條件的影響,反應試劑需低溫保存。在實際操作過程中很難達到這一要求,使得免疫酶的活性下降,從而影響到結果的準確性。應用時還須通過多次洗滌,才能使反應產物和游離底物進行分離,影響到結果的重復性,而且檢測時間較長,無法達到現場檢測的要求。
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